一，簡介

化學發(fā)光免疫分析儀由免疫反應系統和化學發(fā)光分析系統兩部分組成。化學發(fā)光分析系統利用化學發(fā)光物質通過催化劑的催化和氧化劑的氧化形成激發(fā)狀態(tài)的中間體，該激發(fā)狀態(tài)的中間體回到穩(wěn)定的基狀態(tài)時，同時發(fā)射光子(hm)，利用發(fā)光信號測量儀測量光量子的產量。免疫反應系統將發(fā)光物質(在反應劑的激發(fā)下產生激發(fā)狀態(tài)的中間體)直接標記在抗原(化學發(fā)光免疫分析)和抗體(免疫化學發(fā)光分析)上，或酶作用于發(fā)光物質。

化學發(fā)光免疫分析儀的核心檢測器件是光電倍增管(PMT)，通過單光子檢測并傳輸到放大器，增加高壓電流放大，放大器將模擬電流轉換成數字電流，數字電流將發(fā)光信號通過R232數據線傳輸到計算機，得出臨床結果。

二，分類

1.化學發(fā)光標記免疫分析。

化學發(fā)光標志免疫分析又稱化學發(fā)光免疫分析(CLIA)，是一種用化學發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學發(fā)光物質有亞啶酯類化合物-acridiniumester(AE)，是有效的發(fā)光標志物[3]，起動發(fā)光試劑(NaOH2H2O2)發(fā)光，強直接發(fā)光在1秒內完成，快速閃爍發(fā)光(見圖1)。亞啶酯作為標志用于免疫分析，化學反應簡單快捷，不需要催化劑；檢測小分子抗原采用競爭法，大分子抗原則采用夾心法，非特異性結合少，底部低；與大分子結合不會減少產生的光量，從而提高靈敏度。

2.發(fā)光酶免疫分析。

化學發(fā)光酶免疫分析(chemiluminescentenzymeimmunoassay,CLEIA)應屬于酶免疫分析(chemiluminescentenzyme光劑，操作步驟與酶免疫分析完全相同[5]:用酶標記生物活性物質(如酶標記的抗原或抗體)進行免疫反應，免疫反應復合物上的酶再作用于發(fā)光基礎，在信號試劑的作用下發(fā)光，用發(fā)光信號測定器進行發(fā)光測定。目前常用的標記酶是辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)，各有發(fā)光基礎。

第三，發(fā)光試劑。

CLEIA常用的基質是魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰胺，luminol)，或者它的衍生物，如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰胺)，是一種重要的發(fā)光試劑。在堿性緩沖液中進行過氧化物酶和活性氧[過氧化陰離子(O2-)、單線態(tài)氧(1O2)、羥自由基(OH·)、過氧化氫(H2O2)的存在下，產生激發(fā)態(tài)中間體，當它們返回基質時發(fā)光，波長為425nm。

早先，魯米諾直接標記抗原(或抗體)，但標記后的發(fā)光強度降低，影響靈敏度。Z近，魯米諾用過氧化物酶標記抗體。免疫反應后，魯米諾用作發(fā)光基礎。在過氧化物酶和啟動發(fā)光試劑(NaOH2H2O2)的作用下，魯米諾發(fā)光，發(fā)光強度取決于酶免疫反應物中酶的濃度。KodakAmerliteTM半自動分析系統是利用該系統專門設計的。

第四，增強發(fā)光酶

增強型發(fā)光酶免疫分析，在發(fā)光系統中加入增強型發(fā)光劑，如對2碘苯酚等，以增強發(fā)光信號，并在較長時間內保持穩(wěn)定，便于重復測量，從而提高分析的靈敏度和準確性。自動化分析儀還可以通過計算機嚴格控制，自動操作，如加試劑睪酮、混合、溫育、洗滌、加試劑、發(fā)光計數、數據處理、標準曲線繪制，直至完成患者血清樣品的分析和打印結果。Am erliteTM發(fā)光增強酶免分析系統用熒光素、噻唑等增強劑, 其發(fā)光時間可持續(xù)長達20m in, 試劑盒有甲狀腺功能檢測的促甲狀腺素、三碘甲腺原氨酸、甲狀腺素、甲狀腺素結合球蛋白、游離甲狀腺素, 與性激素有關的有促黃體激素、促卵泡激素、人絨毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睪酮, 以及其他方面的如癌胚抗原、鐵蛋白、地高辛等。